НАБОР ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РТГА)

Основные характеристики набора

Торговое наименование

НАБОР ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РТГА)

Состав набора

• гемагглютинирующий антиген к вирусу ПГ-3
• специфическая сыворотка к вирусу ПГ-3
• контрольная сыворотка

Назначение

Выявление антител к вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота в реакции торможения гемагглютинации

Описание

Действующим началом диагностического набора является антиген вируса парагриппа-3 концентрированный твин-эфиром.

Форма выпуска

Диагностический набор выпускается в жидком виде.

Состав

В состав диагностического набора входят следующие компоненты:

• гемагглютинирующий антиген к вирусу ПГ-3 - 1 флакона в объеме 1,5 см³
• специфическая сыворотка к вирусу ПГ-3 – 1 флакона в объеме 1,0 см³
• контрольная сыворотка - 1 флакона в объеме 1,0 см³

Показания для применения

Набор предназначен для выявления антител к вирусу парагриппа-3 крупного рогатого скота в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Способ применения

В качестве анализируемых образцов используют образцы сыворотки крови от больных и переболевших животных в начале заболевания и через 3-4 недели.

Для проведения исследований направляют не менее 15-20 проб сывороток.

Сыворотки хранят в условиях, предотвращающих бактериальный пророст при температуре от 2 до 8°С не более 15 дней.

Для более длительного хранения (до 2 месяцев) возможно добавление борной кислоты в качестве консерванта (2-3 кристаллика на 1 см³ сыворотки). Диагностическая гипериммунная сыворотка после растворения может храниться при температуре 2 – 8°С в пробирке под резиновой пробкой до 10 дней.

Допускается хранение сывороток при минус 20°С в течение года, перед исследованием их размораживают при комнатной температуре.

Парные сыворотки должны исследоваться одномоментно (независимо от результатов первого исследования), для этого первая сыворотка до исследования должна храниться в замороженном виде.

Образцы сывороток с выраженным гемолизом, бактериальным проростом, а также длительно хранившихся без замораживания или повторно замораживаемых не допускается.

Все исследуемые образцы должны быть идентифицированы (промаркированы).

Маркировка компонентов

На флаконы с компонентами наклеивают этикетки с указанием: наименование организация-производителя, ее адрес и товарный знак, наименование компонента, объем во флаконе, номер серии, дата изготовления, рабочее разведения компонента, срок годности, обозначения СТО.

Флаконы согласно комплектации, упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 33781 или пластиковые (полистироловые) контейнеры с разделительными перегородками, обеспечивающими их неподвижность и целостность.

В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению диагностического набора. На каждую упаковку с набором флаконов наклеивают этикетку, на которой должны быть указаны: наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, телефон, наименование компонентов, количество флаконов в коробке, номер серии, дата изготовления (месяц, год), срок годности (месяц, год), количество определений, условия хранения, обозначение СТО.

Подготовка компонентов и растворов для РТГА

Проверка титра антигена. Во все лунки микропанели вносят по 0,05 см³ физиологического раствора pH 7,2-7,4. В первые лунки каждого ряда вносят по 0,05 см³ антигена и титруют для двукратного разведения от 1:2 до 4096. Затем во все лунки вносят по 0,05 см³ 1% суспензии эритроцитов морской свинки. Кровь берут у морской свинки из сердца, в колбу с 1,0% взвесью лимоннокислого натрия на физиологическом растворе pH 7,2-7,4. Отмывают эритроциты в физиологическом растворе pH 7,2-7,4 и готовят 1,0% взвесь.

Проверка 4АЕ антигена.

Титр антигена делят на 4 (например: если титр 512:4=128, значит антиген необходимо развести в 128 раз). Для этого берут 1,0 см³ антигена и 127,0 см³ физиологического раствора pH 7,2-7,4. Хорошо взбалтывают.

Для проверки 4АЕ во все лунки вносят физиологический раствор рН 7,2-7,4 по 0,05 см³. Далее в первые лунки каждого ряда вносят заранее разведенный антиген, титруют и во все лунки вносят 1,0% взвесь эритроцитов морской свинки, встряхивают и оставляют при комнатной температурена 2 часа.

Для проведения диагностических исследований исследуемую сыворотку крови разводят 1:4 дистиллированной водой переносят в стерильную пробирку и прогревают 30 минут при температуре 56°С

Выполнение анализа

Реакцию торможения гемагглютинации проводят микрометодом в полистироловых планшетах с U-образными лунками для иммунологических реакций однократного применения.

В лунки микропанели вносят по 0,05 см³ физиологического раствора рН 7,2-7,4. В первые лунки каждого ряда вносят исследуемые сыворотки в количестве 0,05 см³. На каждую исследуемую сыворотку необходимо два ряда лунок. Последующими переносами получают двукратные разведения сывороток от 1:2 до 4096. Затем в каждую лунку вносят антиген (4АЕ), панель встряхивают и оставляют на 60 минут при температуре 37°С

Через 60 минут - во все лунки вносят по 0,05 см³ 1,0% взвеси эритроцитов морской свинки, встряхнуть и оставляют при комнатной температуре на 2-3 часа.

Реакцию сопровождают следующим контролями:

а) контроль на отсутствия спонтанной агглютинации физиологический раствор + эритроциты морской свинки.

б) контроль физиологический раствор + контрольная сыворотка + эритроциты морской свинки.

в) контроль физиологический раствор+специфическаясыворотка + эритроциты морской свинки.

Разведенный антиген храниться при температуре 2-8°С - 24 часа, а неразведенный в морозильной камере (-18-20°С) 12 месяцев.

Регистрация и учет результатов

Учет реакции проводят через 3 часа. За титр антител в РТГА принимают наивысшее разведение сыворотки, дающее четкое торможение агглютинации (пуговица). Положительной является сыворотка, дающая в РТГА титры 1:16 и выше.

а) контрольных лунках физиологический раствор + эритроциты морской свинки – реакция должна быть отрицательной.

б) в контрольных лунках физиологический раствор + контрольная сыворотка + эритроциты морской свинки титр должен быт не более 1:8.

в контрольных лунках физиологический раствор + специфическая сыворотка + эритроциты морской свинки титр должен быть не ниже 1:128.

Увеличение титров в парных сыворотках в четыре раза и выше, а также увеличение числа серопозитивных сывороток, свидетельствует о наличии инфекции.

Порядок предъявления рекламации

В случае несоответствия диагностического набора требованиям, указанным в настоящей инструкции, а также его неэффективности, применение данной серии препарата прекращают. Контроль набора диагностического, поступающей по рекламациям проводит организация-производитель.

Меры предосторожности при применении

При проведении исследований необходимо:

- работать в боксированных помещениях для проведения микробиологических исследований с применением индивидуальных средств защиты (защитной одежды и одноразовых резиновых перчаток);

- следует избегать контакта компонентов с кожей и слизистыми, а при попадании на них незамедлительно промыть большим количеством воды;

- не пипетировать ртом;

- в случае пролива образцов и рабочих растворов на рабочие поверхности, необходимо проводить дезинфекционную обработку с использованием дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;

- инструменты и оборудование (до и после работы) подвергать обработке с использованием 70% этилового спирта или дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;

- остатки испытуемых сывороток, полистироловые планшеты после учета результатов обеззараживают путем погружения в 3% раствор хлорамина на 5 часов или автоклавирования при 0,5 атм. в течение 30 минут;

- остатки гемаагглютинирующего антигена не требуют особых условий утилизации и могут быть вылиты в канализацию.

Производитель

ООО «Агровет», 109472, г. Москва, ул. Ташкентская, д. 34, корп. 5.