Официальная инструкция

НАБОР ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА)

ID: eDOC-00995 Версия: 1.0 Утверждена: Действует до:
Данная страница представляет собой официальную веб-версию инструкции для справочного использования.
Загрузить отсканированную версию

Основные характеристики набора

Торговое наименование
НАБОР ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА)
Состав набора
  • специфический эритроцитарный антиген респираторно-синцитиального вируса
  • контрольный эритроцитарный антиген
  • специфическая гипериммунная сыворотка
  • контрольная сыворотка
  • сыворотка для разбавителя
Назначение
Выявление антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации

Описание

Действующим началом диагностики является антиген респираторно- синцитиального вируса, сенсибилизированный 3% суспензии эритроцитов.

Форма выпуска

Диагностический набор выпускается в жидком виде.

Состав

В состав диагностического набора входят следующие компоненты:

Показания для применения

Набор предназначен для выявления антител к респираторно-синцитиальному вирусу крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации.

Способ применения

В качестве анализируемых образцов используют образцы сыворотки крови от больных и переболевших животных в начале заболевания и через 3-4 недели.

Для проведения исследований направляют не менее 15-20 проб сывороток.

Сыворотки хранят в условиях, предотвращающих бактериальный пророст при температуре от 2 до 8°С не более 15 дней.

Для более длительного хранения (до 2 месяцев) возможно добавление борной кислоты в качестве консерванта (2-3 кристаллика на 1 см³ сыворотки). Диагностическая гипериммунная сыворотка после растворения может храниться при температуре 2 – 8°С в пробирке под резиновой пробкой до 2-х месяцев.

Допускается хранения сыворотки при минус 20°С в течение месяца, перед исследованием их размораживают при комнатной температуре.

Парные сыворотки должны исследоваться одномоментно (независимо от результатов первого исследования), для этого первая сыворотка до исследования должна храниться в замороженном виде.

Образцы сывороток с выраженным гемолизом, бактериальным проростом, а также длительно хранившихся без замораживания или повторно замораживаемых не допускается.

Все исследуемые образцы должны быть идентифицированы (промаркированы).

Маркировка компонентов

На флаконы с компонентами наклеивают этикетки с указанием: наименование организация-производителя, ее адрес и товарный знак, наименование компонента, объем во флаконе, номер серии, дата изготовления, рабочее разведения компонента, срок годности, обозначения СТО.

Флаконы согласно комплектации, упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 33781 или пластиковые (полистироловые) контейнеры с разделительными перегородками, обеспечивающими их неподвижность и целостность. В каждую упаковку вкладывают инструкцию по применению диагностического набора.

На каждую упаковку с набором флаконов наклеивают этикетку, на которой должны быть указаны: наименование организации-производителя, ее адрес и товарный знак, телефон, наименование компонентов, количество флаконов в коробке, номер серии, дата изготовления (месяц, год), срок годности (месяц, год), количество определений, условия хранения, обозначение СТО.

Один комплект рассчитан на 100 определений исследуемых проб микрометодом в РНГА, включая контроли.
Срок годности набора 6 месяцев с даты выпуска при условии хранения в темном месте при температуре от 2 до 8°С.
Не допускается замораживание набора.

Подготовка компонентов и растворов для РНГА

Для проведения РНГА необходимо провести следующие подготовительные работы:

Для приготовления 0,15 М раствор с рН 7,2-7,4 в мерную колбу 1,0 л вносят 20,4 г химически чистого безводного однозамещенного фосфорнокислого калия, в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят водой до метки 1,0 литр (раствор А). В другую мерную колбу на 1,0 литр вносят 26,7 г химически чистого двузамещенного фосфорнокислого натрия-двуводного, растворяют в небольшом количестве воды и доводят до метки 1,0 литр (раствор Б). Растворы А и Б можно хранить при температуре 2 - 8°С в течение месяца. Для приготовления буфера к 24,0 см³ раствора А добавляют 76,0 см³ раствора Б и вносят 0,85 г химически чистого хлористого натрия. С помощью pH-метра проверяют pH буфера и при необходимости доводят до pH 7,2-7,4 растворами А или Б.

Для приготовления разбавителя к 100 см³ буфера добавляют 1,0 см³ нормальной сыворотки крови кролика. Для этого ампулу с сывороткой встряхивают и содержимое ампулы переносят в буфер. Затем разбавитель прогревают при температуре 65-66°С в течение 40 минут, дают остыть при комнатной температуре, добавляют 0,3 см³ формалина и фильтруют через бумажный фильтр. Хранят разбавитель при комнатной температуре в течение месяца. При появлении мути на дне сосуда с разбавителем его снова фильтруют. Мутный разбавитель не используют.

Для проведения диагностических исследований исследуемую сыворотку крови разводят 1:2 дистиллированной водой переносят в стерильную пробирку и прогревают 30 минут при температуре 55 - 57°С.

Флакон с эритроцитарным антигеном тщательно встряхивают до полной гомогенизации содержимого, стерильно отбирают 1,0 см³ и переносят во флакон с 2,0 см³ разбавителя (0,15М фосфатно-буферный физиологический раствор pH 7,2-7,4, с добавлением нормальной сыворотки кролика в количестве 1,0% от объема буфера).

Выполнение анализа (РНГА)

Реакцию непрямой гемагглютинации проводят микрометодом в полистироловых планшет с U-образными лунками для иммунологических реакций однократного применения.

В лунку микропанели вносят по 0,05 см³ разбавителя. В первые лунки каждого ряда вносят исследуемые сыворотки в количестве 0,05 см³. На каждую исследуемую сыворотку необходимо два ряда лунок. Последующими переносами получают двукратные разведения сывороток от 1:2 до 1:4096. Затем в первый ряд лунок вносят по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса, а во второй ряд по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси контрольного эритроцитарного антигена. Панель встряхивают, закрывают специальной крышкой и на 2-3 часа ставят при комнатной температуре.

Реакцию сопровождают следующими контролями:

а) контроль на отсутствие спонтанной агглютинации специфического и контрольного эритроцитарного антигенов.

В два ряда лунок вносят по 0,05 см³ разбавителя, затем в первый ряд лунок вносят по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса, а во второй ряд по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси контрольного эритроцитарного антигена;

б) контроль на отсутствие агглютинации специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса и контрольного эритроцитарного антигена с контрольной сывороткой крупного рогатого скота.

В два ряда лунок микропанели вносят по 0,05 см³ разбавителя, в первые лунки вносят по 0,05 см³ контрольной сыворотки крупного рогатого скота и титруют. Затем в первый ряд вносят по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса, а во второй ряд по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси контрольного эритроцитарного антигена;

в) контроль на активность специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса со специфической сывороткой крупного рогатого скота. В ряд лунок микропанели вносят по 0,05 см³ разбавителя, в первую лунку вносят 0,05 см³ специфической сыворотки и титруют, как исследуемые сыворотки, затем вносят по 0,025 см³ 1,0%-ной взвеси специфического эритроцитарного антигена респираторно-синцитиального вируса;

г) контроль специфической сыворотки на наличие антител к контрольному эритроцитарному антигену. В ряд лунок микропанели вносят по 0,05 см³ специфической к антигену респираторно-синцитиального вируса сыворотки и титруют, затем вносят по 0,025 см³ 1%-ной взвеси контрольного эритроцитарного антигена.

Регистрация и учет результатов

Учет результатов реакции проводят через 2-3 часа определяя наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов.

Реакцию считают положительной (оценивают «+»), если аглютинировавшиеэритроциты выстилают дно лунки, образуя по форме перевернутого «зонтика».

Реакцию считают отрицательной (оценивают «-»), при оседании эритроцитов на дно лунки в виде диска или компактного кольца с четким ровным краем.

Примечание. В первых лунках планшета может наблюдаться «феномен» сползания агглютинированных эритроцитов с образованием по краю лунки кольца с неровным краем (эффект «свертывания зонтика»).

За титр антител в РНГА принимают наивысшее разведение сыворотки, дающее четкую агглютинацию-равномерное агглютинация эритроцитов «зонтик» по всей лунке.

Учёт реакции проводят только при условии четких результатов, полученных в контролях.

Контроли реакции:

Результаты РНГА с испытуемыми сыворотками оценивают по титру антител. Положительным результатом, считают сыворотки, дающие со специфическим эритроцитарным антигеном респираторно -синцитиального вируса титр 1:128 и выше.

При наличии в испытуемых сыворотках антител с контрольным эритроцитарным антигеном в титрах более 1:8, положительными считают сыворотки, которые со специфическим эритроцитарным антигеном к респиратоно-синцитиальному вирусу дали титры в 4 и более раз выше контроля (например в контроле 1:32, то в исследуемой сыворотке должно быть не ниже 1:512).

Диагностика острой вирусной инфекции и дифференциация вакцинных антител. Увеличение титров в парных сыворотках в 4 раза и выше, свидетельствует о наличии инфекции.

Порядок предъявления рекламации

В случае несоответствия диагностического набора требованиям, указанным в настоящей инструкции, а также его неэффективности, применение данной серии препарата прекращают. Контроль набора диагностического, поступающей по рекламациям проводит организация-производитель.

Меры предосторожности при применении

При проведении исследований необходимо:

- работать в боксированных помещениях для проведения микробиологических исследований с применением индивидуальных средств защиты (защитной одежды и одноразовых резиновых перчаток);

- следует избегать контакта компонентов с кожей и слизистыми, а при попадании на них незамедлительно промыть большим количеством воды;

- не пипетировать ртом;

- в случае пролива образцов и рабочих растворов на рабочие поверхности, необходимо проводить дезинфекционную обработку с использованием дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;

- инструменты и оборудование (до и после работы) подвергать обработке с использованием 70% этилового спирта или дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;

Остатки испытуемых сывороток, полистироловые планшеты после учета результатов обеззараживают путем погружения в 3% раствор хлорамина на 5 часов или автоклавирования при 0,5 атм. в течение 30 минут.

Остатки диагностикума и акреолизированных эритроциты барана не требуют особых условий утилизации и могут быть вылиты в канализацию.

Производитель

ООО «Агровет», 109472, г. Москва, ул. Ташкентская, д. 34, корп. 5.